- [背景・ねらい]
- 成長は視床下部ー脳下垂体系によって制御されているが、成長に必要な物質の同化制御には膵臓のインスリンが重要な役割を果たしている。そこで、摂取された物質の効率的な同化を促す技術を開発するために水産上重要な魚種のインスリンのアミノ酸配列を明らかにするとともに、生体内でのインスリンの分泌動態を 把握するための特異的測定法を開発した。
- マツカワの膵臓（ブロックマン小体）の酸-エタノール抽出物から逆相クロマトグ ラフィーなどによりインスリンを精製したところ、２種の分子種（I、II）が発見された（図１）。
- インスリン－(Ⅰ)、－(Ⅱ)の一次構造を解析した結果、インスリン－(Ⅱ)のＢ鎖のＮ末端の２残基以外は同一の配列であった。そして、インスリン－(Ⅱ)のＢ鎖のＮ末端の２残基はピログルタミン酸とアラニンであった。ピログルタミン酸を含むインスリンは脊椎動物ではこれまで例がない。
- インスリン－（Ⅱ）を抗原として抗血清を作成し、蛍光基質を使用した競合酵素免疫測 定法を開発した。検出限界はインスリン－(Ⅰ)が８ｐｇ、インスリン－(Ⅱ)が４ｐｇであった。この感度はマツカワ血清中のインスリン濃度を測定するのに十分な感度である。また、哺乳類のペプチドホルモン（図２）、マツカワの膵臓中のインスリン以外のペプチド（グルカゴンなど；図省略）とは交差性が認められず特異的にマツカワインスリンを 検出できることが示された。
- インスリン－(Ⅱ)の生理作用はその構造からインスリン－(Ⅰ)とほぼ相同であることが予想されるが、投与実験等により検討することが重要である。
- インスリン－(Ⅰ)、－(Ⅱ)を区別するには逆相クロマトグラフィー等他の技術と組み合わせることが必要である。
- インスリンのアミノ酸配列は魚種間で保存性が高いため、ヒラメ、マダイ等にもこの測定法は応用できる可能性が高い。
北海道区水産研究所・資源増殖部・浅海育種研究室 [連絡先]０１５４－９１－９１３６ [推進会議]北海道ブロック水産研究関係試験研究推進会議 [専門]水産増殖 [対象]魚介類 [分類]研究
[成果の内容・特徴]
[成果の活用面・留意点]
[具体的データ]
図１ マツカワブロックマン小体の酸－エタノール抽出物の逆相クロマトグラフィーでのインスリンの溶出位置とそのアミノ酸配列
図２ 開発した酵素免疫測定法におけるマツカワインスリン－Ⅰ、Ⅱの標準曲線と哺乳類ペプチドとの交差性
[その他] 研究課題名：魚介類のインスリン様物質の生化学的特性解明 予算区分 ：経常経費 研究期間 ：平成６～８年度 研究担当者：北海道区水産研究所 資源増殖部 浅海育種研究室 安藤 忠 発表論文等：Andoh T. and Nagasawa H. (1997) Homologous enzyme immunoassay fo r insulin and stimulation of insulin secretion by amino acids and glucose in the barfin flounder, Verasper moseri (Pleuronectidae). In "Advances in comparative endocrinology" (Kawashima S. and Kikuyama S. eds.), pp. 1149-1153. Monduzzi Editore, Bologna, Italy. Andoh, T. and H. Nagasawa (1996) A novel type of insulin from the barfin flounder, Verasper moseri. 3rd Internatl. Symp. on Fish Endocrinol., Abstracts, 121.目次へ戻る
